Laporan Bakteriologi II-Identifikasi Mikroorganisme Pada Sampel Urine

BAB I

PENDAHULUAN

A.    Judul Praktikum

Isolasi dan identifikasi mikroorganisme pada sampel urine.

B.     Tujuan

Untuk mengetahui cara identifikasi bakteri dan mengetahui bakteri yang terdapat pada sampel urine.

C.    Prinsip

Memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba, kemudian melakukan pewarnaan gram untuk mengidentifikasi bakteri.

D.    Latar Belakang

Mikroorganisme memegang peranan penting, bahkan eksistensinya merupakan persyaratan mutlak bagi terbinanya semua kehidupan yang lain. Pertumbuhan bakteri dialam dipengaruhi oleh beberapa faktor luar seperti substrat, pertumbuhan, pH, temperature dan bahan kimia.

Mikroorganisme yang ada dialam ini menpunyai morfologi, struktur dan sifat yang berbeda, begitu pula dengan bakteri. Bakteri hampir hidup di semua lingkungan begitupun dalam tubuh manusia. Misalnya dalam urine banyak bakteri yang bisa menyebabkan infeksi saluran kemih.

Didalam urine terdapat beberapa mikroba yang patogen dan non patogen bagi tubuh atau lingkungan. Pada kondisi normal, saluran kemih tidak dihuni oleh bakteri manapun atau mikroba lain. Tetapi uretra bagian bawah terutama wanita dihuni oleh berbagai jenis bakteri salah satunya bakteri aerob.

Urine merupakan hasil metabolisme tubuh yang dikeluarkan melalui ginjal. Bakteri pada urine secara umum paling banyak adalah Escherichia coli. Infeksi saluran kemih sebagian disebabkan oleh bakteri, namun tudak menutup kemungkinan infeksi dapat terjadi karena jamur dan virus.

Oleh karena itu, dilakukan pengamatan, isolasi dan identifikasi agar dapat diketahui jenis mikroorganisme apa yang terdapat pada urine.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

Mikroorganisme pada suatu lingkungan alami merupakan populasi campuran dari berbagai jenis, baik mikroorganisme pada tanah, air, udara, makanan, maupun yang terdapat pada tubuh makhluk hidup. (Bibiana, 2010)

Pemisahan mikroorganisme diperlukan untuk mengetahui jenis, mempelajari cultural, morfologi, fisiologi, karakteristik mikroorganisme tersebut. Teknik pemisahan tersebut disebut isolasi yang disertai dengan pemurnian. Isolasi merupakan rangkaian proses pemisahan mikroorganisme agar didapatkan kultur murni (isolat). Isolate-isolat tersebut kemudian ditumbuhkan pada medium terpisah agar dapat tumbuh dengan baik. (Bibiana, 2010)

Pentingnya mengisoalsi suatu mikroba dari lingkungan kita seperti pada diri kita sendiri karena banyaknya mikroba/bakteri yang sulit untuk diamati atau dibedahkan secara langsung oleh panca indera. Sehingga dengan isolasi akan mempermudah kita untuk melihat dan mengamati bentuk-bentuk pertumbuhan mikroba pada beberapa medium yang berbeda-beda serta melihat morfologi dari mikroba. (Pelczar, 2007)

Mengetahui suatu jenis mikroorganisme diperlukan adanya identifikasi. Proses identifikasi dilakukan dengan cara pengamatan pada sampel yang digunakan. Misalnya sampel urine digunakan untuk pengamatan secara morfologi maupun fisiologi. (Bibiana, 2010)

Identifikasi bakteri pada urine biasanya digunakan untuk mengetahui ada tidaknya bakteri yang sering menyebabkan infeksi saluran kemih (ISK). Bakteri penyebab infeksi saluran kemih adalah jenis bakteri aerob. (Entjang, 2001)

Infeksi saluran kemih adalah salah satu penyakit saluran kemih yang dilalui urine. Infeksi saluran kemih merupakan penyakit nomor 2 paling banyak yang menyerang manusia tiap tahunnya. Saat urin akan melewati saluran kemih maka jalur yang dilaluinya berurutan sebagaimana posisi dari atas ke bawah, yaitu ginjal, ureter, vesika urinaria (kantung kemih) serta uretra. Infeksi saluran kemih diakibatkan oleh bakteri atau kuman yang masuk kedalam saluran kencing yang dapat masuk dari luar, misalnya dari air ketika membersihkan sehabis buang air. (Budiarti T, 2007)

E.coli salah satu bakteri yang dapat menyebabkan infeksi saluran kemih, kantung kemih, ginjal, dan prostat. Infeksi saluran kemih (uretritis) dan kantung kemih (sistitis) menimbulkan gejala demam tidak tinggi, nyerih saat berkemih, sering berkemih, dan terus-menerus merasa ingin berkemih. Infeksi pada ginjal (pyelonefritis) menyebabkan gejala nyeri pada pinggang atau punggung bawah, demam tinggi disertai menggigil, mual, muntah, dan nyeri kepala. Infeksi pada prostat (prostatitis) menimbulkan gejala demam tinggi dengan menggigil, nyeri disekitar anus dan punggung bawah, juga dapat disertai nyerih berkemih dan sering berkemih. Pada beberapa pasien dapat ditemui nyeri otot dan nyeri sendi. (Raynaldi, 2013)

Bakteri pada urine diantaranya kelompok Enterobacteriaceae. Enterobacteriaceae adalah kuman enterik yang hidup diusus besar manusia dan hewan. Kuman enterik adalah kuman berbentuk batang pendek dengan ukuran 0,5m x 3,0 m, negatif gram tidak berspora, gerak positif dengan flagel peritrik (Salmonella, Proteus, Escherichia coli). Sifat biakan kuman enterik adalah koloni kuman biasanya basah, halus, keabu-abuan, permukaannya licin. Pembernihan yang dipakai untuk isolasi kuman enterik adalah Mac Conkey dan EMB serta Agar SS. (Anisah, 2015)

Kultur urin adalah pembiakan mikroorganisme dari bahan urine. Untuk biakan bakteri, ambil urine tanam pada media BHI diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 24 jam. Sampel yang positif ditanam pada media BAP agar dan Mac Conkey, inkubasi pada suhu 37⁰C selama 24 jam. Koloni yang tumbuh dicat gram, bila gram negatif batang, maka tanam di media gula-gula, inkubasi pada suhu 37⁰C selama 24 jam. Baca pertumbuhan bakteri pada media gula-gula, lakukan identifikasi bakteri.

Pada pemeriksaan kultur urine ada beberapa teknik pengambilan kultur urine yaitu:

1.    Urin porsi tengah, pengambilan urin porsi tengah dilakukan dengan cara sebagai berikut

a.    Pada pasien wanita yaitu dengan cara mencuci tangan dengan sabun dan mengeringkannya.

b.    Menanggalkan pakaian dalam pasien dan melebarkan labia dengan satu tangan.

c.    Membersihkan labia dan vulva menggunakan kasa steril satu arah dengan arah dari depan ke belakang.

d.   Membilas dengan air hangat dan keringkan.

e.    Pada saat pengeluaran urin agar memperhatikan bahwa alirn urine selanjutnya ditampung ke dalam wadah steril.

f.     Menutup wadah kembali dengan rapat dan memberikan langsung ke petugas laboratorium.

Pada pasien laki-laki

a.    Mencuci tangan dengan sabun dan mengeringkannya dengan tissue.

b.    Memperhatikan bahwa urine yang pertama keluar dibuang ke toilet, aliran selanjutnya kemudian ditampung di tempat yang steril.

c.    Menutup wadah kembali dengan rapat dan memberikan langsung ke petugas laboratorium.

2.    Urin Kateter

a.    Petugas melakukan desinfeksi dengan alkohol 70% pada bagian selang kateter.

b.    Petugas melakukan aspirasi urine menggunakan spoit sebanyak 20 ml.

c.    Memasukkan urine dari spoit ke dalam wadah steril.

d.   Petugas mengirim urine segera ke laboratorium.

3.    Urin aspirasi suprapubik

a.    Melakukan desinfeksi pada kulit daerah suprapubik dengan menggunakan providone iodine 10%.

b.    Urin di aspirasi tepat di titik suprapubik menggunakan spoit sebanyak 20 ml dengan cara aseptik.

c.    Urin kemudian dimasukkan ke dalam wadah steril kemudian di tutup kembali.

d.   Petugas mengirim urin segera ke laboratorium untuk diperiksa.

4.    Pengambilan pada bayi dan anak-anak

a.    Pasien sebelumnya diberikan minuman untuk memudahkan buang air kecil.

b.    Alat genital kemudian dibersihkan dengan menggunakan kasa steril kemudian dibersihkan dengan air hangat dan di keringkan.

c.    Kemudian anak didudukkan di pangkuan perawat.

d.   Anak dipengaruhi untuk mengeluarkan urin kemudian di tampung pada wadah steril.

e.    Bayi dipasangkan kantung penampung urine yang steril pada alat genital.

f.     Urin kemudian dimasukan ke dalam wadah steril yang telah disediakan dan menutup rapat-rapat.

g.    Specimen di kirim ke laboratorium.

Pertumbuhan >10⁵ organisme/ml dari sediaan urine “mid stream” yang bersih mengindikasihkan suatu infeksi. Tetapi seringkali pada ISK yang sebenarnya, pada pasien-pasien yang simtomatis, jumlah yang lebih kecil telah dapat dikatakan sebagai infeksi (10²-10⁴ organisme/ml), atau pada sampel yang berasal dari aspirasi suprapubis atau dari sampel yang diambil dari kateter. Sebaliknya pada mid stream urin yang terkontaminasi, jumlah koloninya bisa >10⁵ /ml. wanita simtomatik, >10² organisme koliform/ml urin plus piuria atau 10⁵ organisme patogen apapun/ml urin.

BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

A.    Waktu dan Tempat

Hari/Tanggal   : Jumat, 12 Oktober 2018

Waktu             : 13.00 WITA

Tempat            : Laboratorium Mikrobiologi STIKes Mega Rezky Makassar

B.     Alat dan Bahan

1.   Alat yang digunakan antara lain ose, Bunsen, rak tabung, bak pewarnaan, mikroskop, dan inkubator.

2.   Bahan yang digunakan yaitu biakan bakteri, NA (Nutrient Agar), Mac Conkey, Kristal violet, lugol, safranin, dan alkohol.

C.    Prosedur Kerja

1.   Pewarnaan Urine

a.    Disiapkan alat dan bahan.

b.    Diinokulasi/isolasi sampel urine pada media NA (Nutrient Agar) dan Mac Conkey. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37⁰C.

c.    Dilakukan pewarnaan gram.

d.   Dibuat preparat ulas, kemudian difiksasi hingga biakan mengering di preparat.

e.    Diteteskan Kristal violet selama 1 menit, lalu cuci dengan air mengalir.

f.     Ditetesi lugol selama 1 menit. Lalu cuci dengan air mengalir. Kemudian ditetesi alcohol sebagai larutan pemucat, lalu segera cuci dengan air mengalir.

g.    Ditetesi safranin selama 45 detik, lalu cuci dengan air mengalir dan keringkan.

h.    Setelah kering, amati pada perbesaran 1000x

i.      Jika didapatkan bakteri gram positif dilanjutkan dengan uji katalase. Jika didapatkan bakteri gram negative dilanjutkan dengan uji biokimia.

2.   Metode Loop Standar

a.    Disiapkan media NA (Nutrient Agar) dan Mac Conkey

b.    Disebarkan sampel pada media secukupnya menggunakan pipet ukur/ose

c.    Digoreskan dengan menggunakan loop secara kuadran

d.   Diinkubasi pada suhu 30⁰C selama 2 hari

e.    Diamati jumlah, bentuk, dan warna koloninya

f.     Dihitung nilai SPC.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A.    Hasil Pengamatan

Tabel hasil pengamatan sampel urine

Gambar	Keterangan
Media NA (Nutrient Agar)	Bentuk        : menyebar Permukaan  : tidak teratur Tepi             : tidak teratur Warna          : kuning keruh (biakan)
Media Mac Conkey	Bentuk        : menyebar Permukaan  : tidak teratur Tepi             : tidak teratur Warna          : kuning keruh (biakan)
Pewarnaan Gram	Hasil mikroskopik dari pewarnaan gram adalah bakteri gram positif basil berspora.
Uji Katalase	Hasil uji katalase menunjukkan hasil positif (terdapat gelembung disekitar koloni)

B.     Pembahasan

Pada praktikum kali ini dilakukan percobaan yaitu identifikasi bakteri pada urine.

Sampel urine yang digunakan, tidak lagi diisolasi pada media BHIB (Brain Heart Infusion Broth), tetapi langsung diinokulasi pada media NA (Nutrient Agar) dan Mac Conkey, hal ini bertujuan untuk melihat tingkat kepadatan infeksi pada urine. Kemudian media NA (Nutrient Agar) dan Mac Conkey diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37⁰C.

Setelah 24 jam dilakukan pengamatan pada media NA (Nutrient Agar) dan Mac Conkey yaitu mengitung tingkat kepadatan infeksi urine. Hasil yang didapatkan yaitu 10³ jumlah ini sudah dapat dikatakan sebagai infeksi, ini memingkinkan sampel yang didapatkan berasal dari aspirasi suprapubis atau dari sampel yang diambil dari kateter. Sehingga jumlah yang didapatkan kecil. Pada kedua media juga ditumbuhi biakan bakteri, sehingga media yang akan digunakan untuk pewarnaan adalah media Mac Conkey.

Pewarnaan gram dilakukan pertama-tama dengan melakukan fiksasi terhadap preparat ulas agar sampel melekat baik pada preparat. Kemudian dilanjutkan dengan pemberian Kristal violet selama 1 menit lalu dicuci dengan air mengalir. Ditetesi lugol selama 1 menit untuk mempertahankan zat warna pertama, lalu cuci dengan air mengalir. Setelah itu larutan pemucat (alkohol) lalu segera cuci dengan air mengalir. Terakhir ditambahkan safranin selama 45 detik untuk memberi warna pada gram negative.

Dari hasil pengamatan di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000x, didapatkan hasil bakteri gram positif basil berspora. Karena hasilnya gram positif basil, maka uji biokimia tidak dilakukan tetapi melakukan uji katalase.

Uji katalase dilakukan untuk melihat apakah bakteri katalase positif dapat membentuk gelembung udara disekitar koloni. Dan hasil yang didapatkan positif yang ditandai dengan terdapatnya gelembing disekitar koloni.

Bakteri basil berspora ditemukan karena jenis basil ini juga termasuk juga ke dalam bakteri gram positif. Pewarnaan spora tidak dilakukan karena bahan untuk pewarnaan spora tidak tersedia.

Letak spora ada 3 macam yaitu sentral (letak spora berada ditengah-tengah sel), terminal (letak spora ada di ujung sel) dan sub terminal (letak spora berada diantara ujung dan tengah-tengah sel). Jika spora terlepas dari bakteri dan menjadi spora yang bebas, maka spora tersebut bisa tumbuh menjadi satu sel bakteri yang baru.

Dari hasil ini, dicurigai bakteri yang didapatkan yaitu bakteri Bacillus sp atau Clostridium sp.

BAB V

PENUTUP

A.    Kesimpulan

Pada praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa hasil bakteri yang didapatkan pada sampel urine adalah bakteri gram positif basil berspora dan dicurigai bakterinya adalah Bacillus sp atau Clostridium sp.

B.     Saran

Pada saat proses isolasi/inikulasi, pewarnaan, dan pengamatan harus dilakukan dengan cara yang benar dan steril agar hasil yang didapatkan sesuai.

DAFTAR PUSTAKA

Anisah, 2015. Media Alternatif untuk Pertumbuhan Bakteri Menggunakan Sumber Karbohidrat yang Berbeda. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta

Bibiana, 2010. Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta: PT. Raya Grafindo Persada

Budiarti, T. 2007. Fisiologi Mikroba. Jakarta: Bumi Aksara

Entjang, 2001. Mikrobiologi dan Parasit. Bandung: Citra Aditya Bakti

Pelczar, 2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Universitas Indonesia Press

Raynaldi, 2013. Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press